В России используется не самый надежный лабораторный тест на коронавирус. Его цена 23 тысячи рублей

Для подтверждения случаев инфицирования новым коронавирусом используется два типа тестов: томография, с помощью которой определяется клиническая картина заболевания (пневмония), и лабораторный тест, который определяет наличие в биологических образцах нуклеиновых кислот вируса. У каждого теста своя область применения: с одной стороны, лабораторный тест более специфический, но иногда дает ложноотрицательный результат (когда вируса в образце оказывается просто недостаточно). С другой стороны, по результатам томографии можно включить в число носителей вируса пациентов с другими легочными инфекциями.

В соответствии с временными рекомендациями Минздрава в России в качестве лабораторного метода используется ПЦР-диагностика.

(ПЦР - Полимеразная цепная реакция — один из главных лабораторных методов определения в образце ДНК нужной последовательности. Для ПЦР необходима ДНК, поэтому при анализе РНК-вирусов либо стадии ПЦР предшествует стадия синтеза комплементарной ДНК на основе РНК, либо обе реакции — обратная транскрипция и ПЦР — проходят одновременно. Последний вариант как раз используется в большинстве тестов.)

Тест-система, которая для этого применяется, разработана новосибирским предприятием «Вектор». Однако, как стало известно «Медузе» из копий лабораторного протокола «Вектор-ПЦРрв-2019-nCoV-RG» (есть в распоряжении редакции), российский метод диагностики существенно отличается от методов других стран.

Если в протоколах других стран всегда используется одностадийный процесс, а к каждому набору для диагностики прилагается положительный контроль в виде вирусной РНК, то в России тестирование устроено иначе.

(Положительный контроль - То есть образец нуклеиновой кислоты вируса, который всегда должен быть обнаружен — он позволяет опрелить, что с тестом все в порядке.)

Тест проходит в две стадии, причем каждая из них проводится с помощью лабораторных наборов разных производителей (набор «Вектора» используется только на второй стадии, для выбора методики проведения первой стадии даны лишь рекомендации). Таким образом, если тест «Вектора» дает отрицательный результат, это может быть связано не с реальным отсутствием вируса в образце, а с тем, что не сработала первая стадия диагностики, — «Вектор» как производитель теста никак эту возможность не контролирует. О том, как сработала первая стадия, в таких условиях должна заботиться лаборатория, которая проводит анализ. В случае тестов-аналогов из других стран такого произойти не может: в каждый из тестов включен положительный контроль. «Медуза» направила в «Роспотребнадзор» запрос о том, с чем связаны отличия в методике лабораторной диагностики по сравнению с другими странами, однако в течение суток не получила ответа от службы.

Сложные технические детали

2019-nCoV относится к РНК-вирусам, то есть его генетический материал представлен в виде РНК. Для определения наличия такого вируса в образце необходимо сначала синтезировать на матрице РНК комплементарную ДНК (кДНК), а затем провести ПЦР со специфическими к вирусу олигонуклеотидами-праймерами. В одностадийной схеме обе реакции протекают в одной пробирке, а в качестве контроля используется РНК вируса. В двухстадийном процессе сначала синтезируют кДНК на основе РНК с вырожденными праймaерами, а затем проводят ПЦР. При этом важно контролировать процесс на обеих стадиях, так как в результате попадания в образец РНКаз или денатурации обратной транскриптазы тест может дать ложноотрицательный результат.

В инструкции к разработанному «Вектором» тесту для определения коронавируса («Вектор-ПЦРрв-2019-nCoV-RG») описан протокол ПЦР в реальном времени с флюоресцентной меткой, при этом в качестве положительного контроля для ПЦР используется плазмида с кДНК 2019-nCoV. То есть диагностика разбита на две стадии: сначала проводится обратная транскрипция, для которой рекомендуется использовать набор «Реверта-L», разработки ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, а затем уже проводится ПЦР с помощью набора разработки предприятия «Вектор» с праймерами, специфичными для нового коронавируса (их последовательности не указаны, но у ВОЗ есть рекомендации). При этом во всех методиках других стран (за исключеним японской, где есть два варианта) используется одностадийная RT-PCR, а в качестве положительного контроля всегда поставляется образец РНК: либо выделенной из клеточной культуры, либо просто полученной in vitro транскрипцией с плазмиды. Но это всегда РНК-контроль, а не плазмида с кДНК.

В наборе «Реверта-L» нет никакого положительного контроля, поэтому его дизайн отдается на откуп лаборатории, которая проводит диагностику. В отсутствие такого контроля нельзя гарантировать, что результат последующего анализа с помощью набора производства «Вектор» не будет ложноотрицательным. В тест-системах других стран такого риска нет: положительный контроль включен в каждый набор для тестирования и гарантирует работоспособность теста в течение всего процесса.